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【预期用途】用于体外检测血清、单抗等样品的 HPV 中和抗体滴度。
【检验原理】
中和抗体能在体外与 HPV 假病毒中和，使得部分假病毒丧失感染细胞的能力，进入细胞的假 病毒会表达 eGFP、RFP 和 E2-Crimson 等荧光报告基因蛋白。通过酶联免疫斑点分析仪读取并计算 每孔的荧光斑点数，将待测样品孔的荧光斑点数与假病毒对照组的荧光斑点数进行比较， 可计算待 测样品孔的抑制病毒百分比。
通过计算公式可以计算出当50%假病毒被抑制时待测样品的稀释倍数，即 ID50(Inhibition dilution)，用 ID50 来表示待测样品对假病毒的中和活性。ID50值越大，抗体中和活性越高。若样品有具体浓度，可计算50%假病毒被抑制时待测样品的浓度，即EC50 ，EC50=样品浓度/ ID50。
【储存条件及有效期】冷链专运，长期-80℃ 密封贮存。有效期：12个月。避免反复冻融。
【操作要求】该产品为HPV假病毒，中和实验操作需在生物安全柜中进行。
【检测仪器要求】若进行中和抗体检测实验， 需采用可进行荧光斑点计数的仪器， 如Cellular Technology Limited (CTL)酶联免疫斑点分析仪等。
荧光显微镜：仅能观察到绿色荧光蛋白eGFP 及红色荧光蛋白RFP，且不可计数， 不推荐使用。
【必需实验材料要求】
细胞：HEK293FT细胞，无其他推荐的替代细胞。若采用其他细胞，客户需自行进行方法学的建立及验证。
【使用方法】
1.提前预铺细胞： 提前 2-6 小时将 HEK 293FT 细胞消化， 以一定数量(建议细胞数： 1.5×104/孔) 加入 96 孔透明平底无菌细胞培养板中。
2.待测样品系列稀释：在 96 孔无菌细胞培养板中，将待测样品进行系列稀释。 具体板子布局参见图1。
3.病毒稀释：本产品为假病毒母液， 客户依据报告中假病毒的滴度进行稀释使用(1TCID50=1 荧 光斑点)。
4.待测样品与病毒混合孵育： 将系列稀释后的待测样品与稀释后的假病毒溶液混合(推荐体积比 1:1)， 4℃~8℃条件下孵育 1 小时。
5.孵育结束后，将上述混合液与提前预铺的细胞进行混合。
6.将细胞培养板置于 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中继续培养 60 ~96 小时。
7.使用ELISPOT酶联免疫斑点分析仪进行检测，计算感染抑制率(%)。
感染抑制率(%)=1-(样本检测值-细胞对照值)/(病毒对照值-细胞对照值)×100%。
如需更多假病毒，可以联系我们。
