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发布日期:2023/9/1 8:52:00

β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)酶联免疫ELISA试剂盒说明书

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的:

本试剂盒用于测定样本中β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)的含量。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)水平。用纯化的β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)标准品和未知浓度的β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)待检样品,温育后,加入生物素标记的抗IgG抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)浓度。

试剂盒组成 

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1瓶

 

 

8

标准品S1(80μg/ml)

0.5ml×1瓶

2

链霉亲和素-HRP

6ml×1瓶

标准品S2(40μg/ml)

0.5ml×1瓶

3

酶标包被板

12孔×8条

标准品S3(20μg/ml)

0.5ml×1瓶

4

生物素标记的抗-IgG抗体

6ml×1瓶

标准品S4(10μg/ml)

0.5ml×1瓶

5

显色剂A液

6ml×1瓶

标准品S5(5μg/ml)

0.5ml×1瓶  

6

显色剂B液

6ml×1/瓶

9

说明书

1份

7

终止液

6ml×1瓶

10

封板膜

2张

 

标本要求 

1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

操作步骤

  1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
  2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl,在样本反应孔中加入50微升样本,盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
  3. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。
  5. 加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟
  6. 洗涤:操作同4。
  7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  8. 洗涤:操作同4。
  9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)酶联免疫ELISA试剂盒说明书

计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

  1. 如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。
  2. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

线性范围:

2.5μg/ml -80μg/ml

规格:

96人份/盒

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月

β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)酶联免疫ELISA试剂盒说明书

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